01. Versuch: Absorptionsspektroskopie im sichtbaren
Spektralbereich - Enzymkinetik
Die Reaktion von Enzymen mit Substraten verläuft abhängig
von den Konzentrationen mit einem charakteristischen
Zeitverlauf, der erstmals von Michaelis und Menten
beschrieben wurde. Im Versuch wird der Reaktionsverlauf der
alkalischen Phosphatase mit p-Nitrophenylphosphat als
Substrat spektroskopisch untersucht. Begriffe wie
Reaktionshemmung, Produkthemmung, und spezifische Aktivität
werden nahegebracht.
Betreuer
Versuchsanleitung
(PDF)
Fragen zur Versuchsvorbereitung
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Wie funktioniert ein UV-Vis-Spektrophotometer?
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Was besagt das Lambert-Beer'sche Gesetz?
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Wie hängen Aktivierungsenthalpie und
Reaktionsgeschwindigkeit zusammen, und wie funktionieren
Katalysatoren?
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Leiten Sie Gl. (4) aus Gl. (3) her!
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Was erwarten Sie für einen Kurvenverlauf für die
Abhängigkeit der beobachteten Reaktionsgeschwindigkeit v
von der Substratkonzentration S?
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Wo können Sie in dieser Kurve die Michaeliskonstante
Km ablesen?
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Warum ist die Maximalgeschwindigkeit vmax =
k+2[Et] ?
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Wie sehen die Strukturformeln von Substrat und Produkt
der hier untersuchten Reaktion aus? Skizzieren Sie den
Reaktionsmechanismus!
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Welche Farbe hat das Produkt vermutlich, wenn es nur
Licht mit Wellenlängen um 410 nm absorbiert?
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Wie erklären Sie sich, dass Phosphat ein Inhibitor für
die alkalische Phosphatase ist?
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In einem Experiment erhalten Sie nach dem Fit der
Messwerte an die Michalis-Menten-Gleichung ein vmax von
0,3 mM/s. Die Konzentration des Enzyms beträgt im
Messansatz 1,8 µg/ml, seine molare Masse ist 36000
g/mol. Berechnen Sie die Wechselzahl und die spezifische
Aktivität!
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Wie groß ist der apparente Km-Wert, wenn [I] =
KI ist?
Weiterführende Links